電泳還原與非還原區(qū)別
電泳還原與非還原區(qū)別
聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）為網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，具有分子篩效應(yīng)，它有兩種形式：非變性電泳（Native-PAGE）和變性電泳（SDS-PAGE）。非變性電泳，在電泳的過程中，蛋白質(zhì)能夠保持完整狀態(tài)，并依據(jù)蛋白質(zhì)的分子量大小、形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開；而變性電泳（SDS-PAGE）僅根據(jù)蛋白質(zhì)亞基分子量的不同分開蛋白質(zhì)（可以忽略電荷因素）。SDS是陰離子去污劑，作為變性劑和助溶試劑，它能斷裂分子內(nèi)和分子間的氫鍵，使分子去折疊，破壞蛋白分子的二、三級結(jié)構(gòu)。
強還原劑，如巰基乙醇、二硫蘇糖醇（DTT）能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。有些蛋白含有二聚體或多聚體，如果加入β-巰基乙醇，它會還原多聚蛋白之間和內(nèi)部的二硫鍵，這樣，電泳的樣品將會被完全還原成單體甚至亞基形式，不加還原劑的樣品則會保持聚體的形式。
SDS-PAGE有非還原SDS-PAGE和還原SDS-PAGE之分，均是變性條件下的電泳。非還原與還原的區(qū)別是在樣品處理時是否加入還原劑（如β-巰基乙醇或DTT等）。
在進(jìn)行電泳方法選擇時，首先要明確目標(biāo)蛋白的結(jié)構(gòu)特點，以及電泳目的預(yù)期，來決定是否需加入還原劑。
如需測定目標(biāo)蛋白的純度及分子量（為多聚體分子量），則一般采用非還原SDS-PAGE：采用該電泳方法，二聚體、多聚體在凝膠中的位置會處于單體分子量2倍或多倍的位置，利于觀察及各組分的定性定量分析。當(dāng)然這種蛋白的聚體形成是依靠二硫鍵來維持的。
如果僅需測定蛋白質(zhì)亞基結(jié)構(gòu)的分子量，則需采用還原SDS-PAGE，將二聚體、多聚體降解為單體，理想情況下，若還原充分，僅可見亞基條帶。
