離心式快速脫鹽柱(5 kD)
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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DS0540
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離心式快速脫鹽柱(5 kD)
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20套/包
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● 產(chǎn)品介紹
離心式快速脫鹽柱根據(jù)排阻層析原理可以出色地完成蛋白脫鹽或緩沖液置換，適用于高于5 kD蛋白樣品的脫鹽、緩沖液置換或小分子去除。該產(chǎn)品回收率高，幾乎等體積回收蛋白樣品，在脫鹽的同時保持高回收率，樣品不會被稀釋。簡單使用離心操作，無需裝柱，代替比較耗時的傳統(tǒng)透析處理，以達到快速蛋白樣品脫鹽純化以及替換蛋白質(zhì)緩沖液的目的。
脫鹽柱參數(shù)如下：
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排阻極限 Mr
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填料溶脹后體積
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處理樣品體積
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回收率
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工作pH
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5000
Da
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~0.6
ml
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100-200
μl
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70-90%
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2-13
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● 貯存、運輸和效期：
常溫貯存（不能冷凍）；常溫運輸；有效期兩年。
● 注意事項：
1.
操作方便，免去了繁瑣的透析過程，15-20分鐘內(nèi)即可完成樣品處理。
2.
本脫鹽柱建議一次性使用，不建議重復(fù)使用。
● 操作步驟
1. 取脫鹽柱，放入2
ml收集管中。
2.
加入400
μl滅菌水或樣品所需的緩沖液，常溫靜置5
min，1000×g（約3000
rpm）離心2
min。
注：離心力不要高于1000
g，過高的離心力會損傷填料，降低脫鹽效率。
3.
重復(fù)步驟2操作2次。
4. 樣品準備：
樣品在上樣前建議離心取上清或用0.22
μm或0.45
μm濾膜過濾，減少雜質(zhì)影響。
5. 脫鹽處理：
脫鹽柱轉(zhuǎn)移到新的1.5 ml離心管中，脫鹽柱中加入100-200 μl需要處理的蛋白樣品，靜置30秒，1000×g（約3000
rpm）離心2
min，收集回收樣品，保存?zhèn)溆谩?
注：為了確保從小體積樣品中獲得最大的蛋白回收效率，低于100 μl樣品上樣后要在樣品完全吸收后向填料中加入適當體積的超純水或緩沖液壓層，使得總上樣體積為100 μl。
● 注意事項
1. 回收效果：樣品脫鹽后的回收率與樣品的濃度，以及上樣體積相關(guān)。樣品濃度越高，其回收率越高；同時在推薦的樣品上樣量范圍內(nèi)，上樣量越大，其回收率也會隨之升高。通常脫鹽后蛋白的回收率在70-90%。
2. 樣品處理體積要在柱子處理范圍內(nèi)，該脫鹽柱最多處理體積是200
μl樣品，過多會導(dǎo)致收集
管中液體浸沒到脫鹽柱。
3.
填料在高濃度醇溶液或飽和鹽溶液中會有失水收縮現(xiàn)象，請勿將上述溶液進行過柱；
4. 加樣時盡量均勻加至管中心位置；
5.
當樣品濃度過低時（<0.01
mg/ml)，需先將樣品濃縮到所需體積或所需濃度。
● 常見問題
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常見問題
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可能原因
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解決方法
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蛋白回收率偏低
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1、蛋白濃度過低（<0.01
mg/ml)
2、所置換的緩沖液成分或pH非最適緩沖液，產(chǎn)生了非特異性吸附
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1、現(xiàn)對蛋白液進行適當濃縮后脫鹽
2、更換適合的緩沖液，并充分平衡預(yù)裝柱2-3次
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蛋白回收后出現(xiàn)渾濁或沉淀
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1、緩沖液非最適緩沖液
2、緩沖液中的某些離子被除去了，導(dǎo)致蛋白質(zhì)等電點聚沉
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更換適合的緩沖液，并充分平衡預(yù)裝柱2-3次
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脫鹽不干凈
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鹽離子濃度過高（>0.5 M）
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根據(jù)鹽離子濃度適當增加脫鹽次數(shù)或稀釋后脫鹽
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實驗示例：
離心式快速脫鹽柱脫鹽處理樣品
樣品1（lane1-5）：細菌裂解物（正常鹽濃度）
lane1，2，3：細菌裂解物上樣5μl，4μl，3μl；
lane4，5：100μl細菌裂解物經(jīng)過脫鹽柱處理后，上樣5μl
lane 4：S公司脫鹽柱；lane 5：Real-Times脫鹽柱
結(jié)論：脫鹽柱對裂解物所有蛋白都有較好的回收率（80%）
樣品2（lane 6-8）：BSA溶液
lane 6: BSA水溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg）
lane 7：BSA 0.5M NaCl溶液（0.4μg/μl）上樣量5μl（2μg）
lane 8：BSA 0.5M NaCl溶液脫鹽柱處理上樣量5μl
結(jié)論：脫鹽柱脫鹽處理效果明顯（含鹽BSA電泳泳道明顯變寬）
脫鹽后的BSA回收率可達90%
脫鹽程序：脫鹽柱中加入400μl超純水，常溫靜置5min，1000 g
離心3min，重復(fù)2次；脫鹽柱放入新的1.5ml離心管中，加入0.1ml
細菌裂解物或0.2ml BSA溶液，靜置30S，1000g離心3min。
電泳：4-18% RealPAGE預(yù)制膠，1×TGS，200V 37-13mA 53min，
FastBlue蛋白染色液染色30分鐘。