BL21(DE3)化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
目錄號：RTX304
儲存條件：-70℃凍存六個月
產(chǎn)品包裝：
|
貨號
|
RTX304-04
|
|
BL21（DE3）
|
50×100ml
|
|
Competent
cell Control Plasmid pUC18 (1 ng/μl)
|
10μl
|
產(chǎn)品簡介：
本公司生產(chǎn)的BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞采用經(jīng)特殊工藝處理得到，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108cfu/μg，-70℃保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。
BL21(DE3)菌株介紹：
特點：(1)T7 RNA 聚合酶基因的表達(dá)受控于λ 噬菌體DE3
區(qū)的lacUV5 啟動子，該區(qū)整合于BL21
的染色體上。
(2)適用于T7、T7
lac 啟動子的表達(dá)系統(tǒng)，如pET，pEASY。
(3) 適用于非毒性蛋白的表達(dá)。
(4) 使用pUC19
質(zhì)粒DNA 檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)107 cfu/μg
DNA。
操作方法：（以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）
1取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100
μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實驗以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（50
μl的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置90秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3分鐘，該過程不要搖動離心管。
4 向每個離心管中加入500
μl 無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素）， 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)45分鐘（150轉(zhuǎn)/分鐘），目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。
5將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100
μl已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16小時。
注：涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300
μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm, 2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板）
注意事項：
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可多次凍融和放置時間過長，以避免感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時，應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3. 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最低。