1×Western濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜緩沖液（粉末型）
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產(chǎn)品編號(hào)
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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TB1030P
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1×Western濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜緩沖液（粉末型）
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10×1升
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● 簡介：
1×Western濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜緩沖液（粉末型）可以用于Western時(shí)濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜，原始配方是 Towbin buffer（1×）(Towbin et al. PNAS 1979，76:4350-4): 25 mM Tris, 192 mM glycine, 10-20 % 甲醇, SDS 0.01-0.1 %，pH ~8.3。為方便客戶使用，1×轉(zhuǎn)膜緩沖液（粉末型）中沒有添加甲醇和SDS，客戶根據(jù)需要配制1×轉(zhuǎn)膜緩沖液時(shí)自行添加。
● 保存、運(yùn)輸和貯存：
常溫保存，有效期兩年。配成溶液后建議4℃保存，有效期6個(gè)月。
加入甲醇或/和SDS的1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液建議現(xiàn)用現(xiàn)配，不建議保存。
● 1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液配制方法：
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1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液 配制量 1升
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1×Western濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜緩沖液（粉末型）
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一袋粉末
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超純水
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約600
ml
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變性蛋白
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非變性蛋白
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＜20 kD蛋白
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無水甲醇
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20%
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5-10%
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SDS
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0.01%
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0.01%
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20-80 kD蛋白
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無水甲醇
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10%
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0-5%
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SDS
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0.05%
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0.05%
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＞80 kD蛋白
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無水甲醇
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10%（NC膜）
0-5%（PVDF膜）
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0%
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SDS
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0.1%
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0.1%
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超純水
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定容至1升，不要調(diào)節(jié)pH，pH~8.3
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注：甲醇和SDS在轉(zhuǎn)膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加結(jié)合在膜上，而SDS讓蛋白更加離開膜。因此對大蛋白轉(zhuǎn)膜來說，多加SDS，少加甲醇；而對小蛋白轉(zhuǎn)膜，多加甲醇，少加SDS。
● 轉(zhuǎn)膜：
1. 膜的選擇：轉(zhuǎn)膜可以選擇PVDF膜或NC膜。根據(jù)蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說來，大于20 kD蛋白選擇0.45
μm孔徑，低于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化。
蛋白轉(zhuǎn)膜三明治制作：
負(fù)極（電轉(zhuǎn)夾黑色面）-海綿墊-1層1
mm厚度濾紙-凝膠-膜-1層1
mm厚度濾紙-海綿墊-正極（電轉(zhuǎn)夾白色面）
3. 轉(zhuǎn)膜條件：
以下轉(zhuǎn)膜條件僅供參考，客戶針對自己的目的蛋白，最好經(jīng)過1-2次預(yù)實(shí)驗(yàn)后，確定最佳的轉(zhuǎn)膜條件。
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膜孔徑
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蛋白大小
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穩(wěn)流
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建議時(shí)間
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降溫措施
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0.22 μm
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低于20 kD
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200 mA
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~30分鐘
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不需要
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0.45 μm
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20-50 kD
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300 mA
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~45分鐘
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需要
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0.45 μm
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50-200 kD
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350 mA
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~50分鐘
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需要
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0.45 μm
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高于200
kD
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350 mA
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~2.5-4.5小時(shí)
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需要
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